A Coloração de Gram desenvolvida em 1884, pelo bacteriologista Hans Christian Gram. Técnica que tem como objetivo classificar bactérias em gram-positivas ou gram-negativas, segundo a cor com que estarão coradas no final do processo.
Parede celular
Para entendermos a coloração, precisamos conhecer os envoltórios de ambas bactérias. Na gram-negativa, observamos a membrana plasmática, seguida da parede celular, de uma só camada de peptideoglicano, e de outra membrana de lipopolissacarídeos. Na gram-positiva, temos a membrana, seguida de uma parede celular, com várias camadas de peptideoglicano.
Técnica
O processo é bem simples. Começamos pegando uma lâmina limpa e desengordurada, levando-a até a bancada preparada. O esfregaço, que é a passagem da cultura, que pode estar na placa de Petri (meio sólido) ou no tubo (meio líquido) para a lâmina, é feito ao redor do bico de Bunsen. Para realizá-lo, precisamos de uma agulha ou alça de platina, a qual será flambada no bico de Bunsen. Elas servem para “pescar” as bactérias. Após o esfregaço, fixamos as bactérias com auxílio do calor do bico de Bunsen, assim, podemos começar a coloração. A coloração é sempre feita à pia. O primeiro passo é adicionar o corante cristal violeta e esperar 1 minuto. Retiramos o excesso com de água destilada. No segundo passo, adicionamos o iodo, o qual auxilia na fixação do cristal violeta. Esperamos mais 1 minuto. No terceiro passo, fazemos uma lavagem com álcool e, posteriormente, com água. O álcool irá dissolver a membrana de lipopolissacarídeos, aumentando a permeabilidade. Desse modo, o corante cristal violeta com iodo não ficará retido na parede das gram-negativas. Para finalizar, adicionamos safranina ou fucsina, corando as gram-negativas. Ao analisar no microscópio, as gram-positivas estarão azul-arroxeadas, já as gram-negativas, rósea-avermelhadas.
Gram-positivas mais famosas
Bacillus, Clostridium, Lactobacillus, Staphylococcus, Streptococcus, entre outras.
Gram-negativas mais famosas
Escherichia, Klebsiella, Enterobacter, Pseudomonas, Salmonella, entre outras.
Bactérias que não coram por coloração de Gram
São conhecidas como Bacilos Álcool Ácido Resistentes (BAAR). A parede celular dessas bactérias é diferenciada e, quando corada, não pode ser descorada por soluções ácidas. É o caso das micobactérias, sendo seu principal representante Mycobacterium tuberculosis, causador da Tuberculose.
Fontes pesquisadas:
POTON, André. Como é feito o método de Gram?. Disponível em: https://blog.jaleko.com.br/como-e-feito-o-metodo-de-gram/#:~:text=Existem%20bact%C3%A9rias%20que%20n%C3%A3o%20se,Mycobacterium%20tuberculosis%2C%20causador%20da%20Tuberculose.
Coloração de Gram – O que é bactéria Gram-positiva e Gram-negativa?. 18 out. 2019. Disponível em: https://kasvi.com.br/bacteria-gram-positiva-gram-negativa/.
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